Qu’est-ce qu’un test d’endotoxines et quand un contrôle des pyrogènes est-il nécessaire ?

Au-delà de la biopharmacie | FAQ sur la gélatine pharmaceutique

Réponse courte :Le dosage des endotoxines mesure les endotoxines bactériennes, un type de pyrogène pouvant provoquer de la fièvre si elles pénètrent dans la circulation sanguine. Ce dosage est généralement réalisé par le test LAL (lysat d'amœbocytes de Limulus) ou une méthode équivalente. Le contrôle des pyrogènes n'est requis que dans certains contextes, principalement lorsque la gélatine ou un dérivé de gélatine est destiné à des produits injectables, des vaccins, des produits biologiques ou d'autres applications stériles. La gélatine utilisée pour les gélules et comprimés oraux classiques n'est généralement pas soumise à un contrôle des endotoxines, et les exigences applicables sont toujours définies par le produit fini et la réglementation en vigueur.

Pyrogènes et endotoxines : la différence fondamentale

Un pyrogène est toute substance susceptible de provoquer de la fièvre lorsqu'elle atteint la circulation sanguine. L'endotoxine bactérienne, un composant de la membrane externe des bactéries Gram négatif, est le pyrogène le plus courant et le plus étudié ; c'est celle que les tests pharmaceutiques ciblent généralement. Les endotoxines sont thermostables et peuvent donc survivre aux procédés qui détruisent les bactéries. C'est pourquoi les matériaux destinés à une administration par voie parentérale ou stérile doivent être testés et non considérés comme stériles.

La raison pour laquelle cette exigence dépend du mode d'administration

La tolérance aux endotoxines varie considérablement selon la voie d'administration. Le tube digestif est exposé régulièrement aux endotoxines et les élimine normalement, ce qui explique pourquoi les formes orales telles que les gélules et les comprimés ne nécessitent généralement pas de contrôle des pyrogènes ou des endotoxines. La présence d'endotoxines devient un critère de qualité essentiel uniquement lorsqu'une substance ou son extrait peut atteindre la circulation sanguine, les tissus ou d'autres sites normalement stériles, comme dans le cas des produits injectables, des préparations parentérales, de la stabilisation des vaccins ou des produits biologiques, et de certaines applications de soins des plaies ou de contact tissulaire.

Lorsque le contrôle des pyrogènes ou des endotoxines s'applique à la gélatine

• formes posologiques injectables ou parentérales- si de la gélatine apparaît dans une formulation injectable, l'excipient doit normalement satisfaire à une exigence en endotoxines fixée pour ce produit.
• Vaccins et produits biologiques- La gélatine utilisée comme stabilisant dans les produits administrés par injection est contrôlée en fonction des spécifications du produit fini.
• Applications stériles et médicales- Certaines utilisations impliquant un contact tissulaire, des implants ou des dispositifs peuvent nécessiter des matériaux à faible teneur en endotoxines.
• Grades spécialisés non gélifiants- Les gélatines hydrolysées ou non gélifiantes destinées à la culture cellulaire ou à des usages similaires sont parfois fournies en qualité à faible teneur en endotoxines, là encore uniquement lorsque l'application l'exige.

La gélatine pharmaceutique classique utilisée pour les enveloppes de capsules, les comprimés et autres formes posologiques orales solides n'est généralement pas soumise à des limites d'endotoxines, car le produit fini ne comporte pas une telle exigence.

Méthodes d'essai couramment utilisées

Lorsqu'un test d'endotoxines est requis, le choix de la méthode est conforme à la pharmacopée en vigueur et à la monographie du produit. La méthode la plus connue est le test LAL (lysat d'amœbocytes de Limulus), qui utilise un lysat de cellules sanguines de limule et réagit aux endotoxines par une coagulation ou une coloration mesurable. Les dosages du facteur C recombinant et le test d'activation des monocytes (MAT) sont des options plus récentes, tandis que le test de pyrogènes chez le lapin mesure directement la réponse fébrile plutôt que les endotoxines seules. Les résultats sont généralement exprimés en unités d'endotoxines, par exemple par gramme ou par milligramme de produit, conformément aux spécifications convenues.

Que rechercher sur un certificat d'authenticité ?

Si votre produit nécessite réellement une gélatine à faible teneur en endotoxines, demandez à votre fournisseur une qualité certifiée à faible teneur en endotoxines et vérifiez que le certificat d'analyse mentionne le résultat d'analyse des endotoxines, la méthode utilisée et la limite de référence. Si votre produit est une capsule ou un comprimé oral, ne présumez pas qu'un certificat de qualité alimentaire ou pour capsules exige une mention relative aux endotoxines ; inversement, ne présumez pas qu'une qualité pour capsules convienne à une utilisation injectable. En cas de doute, confirmez les exigences auprès de votre service des affaires réglementaires ou de votre équipe qualité avant de spécifier la qualité.

Lectures complémentaires

Pour une vue d'ensemble, voircomment lire un certificat d'analyse (COA) d'une gélatine pharmaceutiqueetQuelles limites microbiennes s'appliquent à la gélatine pharmaceutique ?.